Tutti a microscopi frequentemente, sofisticati e ben attrezzati non riescono a produrre immagini eccellenti a causa dell'uso errato della sorgente luminosa, che di solito porta a un'illuminazione del campione inadeguata. Se ottimizzata, l'illuminazione del campione dovrebbe essere luminosa, senza bagliore e uniformemente dispersa nel campo visivo.
Ci sono numerose fonti di luce disponibili per illuminare i microscopi, sia per l'osservazione di routine che per la fotomicrografia critica. Una fonte di luce più comune, a causa del suo basso costo e della lunga durata, è la lampada alogena di tungsteno da 50 o 100 watt, come illustrato alla base del diagramma del microscopio nella Figura 1, che descrive anche i percorsi ottici in un tipico moderno microscopio alla luce trasmessa. In questa figura, la lampada Tungsten-Halogen emette uno spettro continuo di luce centrata a 3200 K (se impostata su una tensione della lampada di +9 volt), che viene quindi passata attraverso un collettore e lenti di campo prima di essere riflessa nel condensatore sottostage e sul specifico. Immagine che forma i raggi di luce vengono catturati dall'obiettivo del microscopio e passati negli occhi o diretti da un beamsplitter in una delle diverse porte della fotocamera. Durante tutto il percorso ottico del microscopio, l'illuminazione è diretta e focalizzata attraverso una serie di diaframmi e lenti mentre viaggia dalla fonte per illuminare il campione e quindi negli oculari o l'attaccamento della telecamera. L'allineamento dei componenti ottici di un microscopio per ottimizzare l'illuminazione nei microscopi moderni viene eseguito seguendo le regole dell'illuminazione di Köhler. Maggiori dettagli su come sono allineati sia i microscopi ottici trasmessi che quelli riflessi per l'illuminazione corretta di Köhler, discussi nelle nostre sezioni sulla creazione di un microscopio a lume e alla luce. I percorsi ottici mostrati sopra nella Figura 1 sono tipici per un microscopio alla luce trasmessa e coinvolgono un numero di lenti, diaframmi, specchi e beamsplitters per dirigere la luce attraverso il microscopio.
Le lampade Tungsten-Halogen sono relativamente luminose con uno spettro di colore centrato a 3200 K (se impostate a circa +9 volt), ma richiedono filtri di conversione a colori per aumentare la temperatura del colore all'equivalenza della luce del giorno. Un'altra popolare sorgente di luce è la lampada da 75 a 150 watt a causa della sua luminosità e una lunga vita molto, una produzione relativamente uniforme attraverso lo spettro visivo e una temperatura di colore che si avvicina a quello richiesto dalle emulsioni del film diurna. Laddove è richiesta un'intensità della luce molto elevata, vengono spesso utilizzate lampade di alrotto di stagno. Influencencemicroscopia, particolare ai fini della fotomicrografia critica, sono spesso impiegati bruciatori di mercurio da 100 watt o 200 watt. Negli ultimi anni, potrebbero essere state usate le luci dell'arco di carbonio o le lampadine di zirconio, ma queste fonti sono raramente viste oggi. Per ulteriori informazioni e una discussione dettagliata sull'ampio spettro di lampade disponibili per l'illuminazione del microscopio, visitare la nostra sezione On Furges per microscopia e fotomicrografia.
L'allineamento dell'illuminazione della fonte attraverso percorsi ottici nella microscopia leggera riflessa è anche di preoccupazione primaria, particolare per quanto riguarda la metallografia, l'ispezione del wafer di semiconduttore e i notevoli nuovi progressi fatti nella microscopia a fluorescenza. I microscopi leggeri riflessi sono anche illuminati con una varietà di fonti di luce (come discusso sopra) e possono essere regolati per prestazioni ottimali usando l'illuminazione di Köhler. Questo è discusso in modo più dettagliato nella nostra sezione sulla configurazione dell'illuminazione di Köhler per la microscopia leggera riflessa. I percorsi di illuminazione per microscopia leggera riflessa sono anche l'argomento di diversi tutorial Java interattivi, incluso quello collegato direttamente di seguito.
Nel suo eccellente libro "Fotografia attraverso il microscopio", John Dellyarues che tra l'80 e il 90 percento di tutte le fotomicrografie presentate a concorsi, mostre e pubblicazioni scientifiche sono vittime di ottiche allineate in modo improprio che si traduce in scarsa illuminazione di campioni. Questo è uno dei problemi più comuni con la microscopia e la fotomicrografia in generale e un esame a sorpresa dei microscopi degli studenti in molti laboratori universitari rivelerà un'abbondanza di condensatori sottostanti scarsamente adeguati e fonti di illuminazione. Sospettiamo che l'allineamento e la regolazione errati sia del condensatore sottoposto e del diaframma sul campo, sull'intera gamma di obiettivi su un determinato microscopio, siano la più grande fonte di errori nella fotomicrografia.
La necessità di un'adeguata illuminazione non può essere enfatizzata. Troppo spesso, un microscopio da $ 25, 000 è ridotto al livello di un ingrandimento della mano mediante illuminazione e allineamento impropri, con conseguenti fotomicrografie che sono superate da quelle prese con un microscopio da $ 2000 in condizioni ottimali dell'illuminazione di Köhler. Nelle sezioni di accompagnamento di questo primer che si occupano della teoria dell'illuminazione di Köhler e della sua implementazione (entrambe fortrasmitded e riferimento) discutiamo di aspetti critici della configurazione del microscopio e abbiamo incluso una varietà di interattive
